2012年9月，酒保戴斯蒙·邁爾斯（Desmond Miles）被跨國製藥公司Abstergo劫持作為「Animus」（一台能以基因追溯祖先記憶之機器）的第十七個實驗體，目的為獲得其活躍於1191年（第三次十字軍東征）、隸屬敍利亞刺客組織（阿薩辛派）之刺客祖先阿泰爾·伊本·拉哈德（Altaïr ibn La-Ahad）的一段記憶。

當年阿泰爾奉命與另外兩名刺客到所羅門聖殿尋找一個古代遺物，卻對於自己過度自信，不但被刺客之宿敵聖殿騎士團阻止且違背了三大刺客教條－不殺無辜、不暴露行蹤、不連累刺客組織。於回到刺客組織位於馬西亞夫的保壘後，刺客組織之首拉希德丁·錫南（Rashid ad-Din Sinan）把阿泰爾降至最低級別，同時命其刺殺九名位於聖地（耶路撒冷、大馬士革、阿卡）內的騎士團重要人物以作贖罪，並為十字軍及撒拉森勢力之間帶來和平。九名目標（部分為真實人物）分別為大馬士革武器商人Tamir、醫院騎士團大團長Garnier de Naplouse、耶路撒冷奴隸販子Talal、大馬士革富商Abu'l Nuqoud、阿卡攝政王William Ⅴ of Montferrat、耶路撒冷攝政王Majd Addin、條頓騎士團大團長Sibrand、大馬士革學者Jubair al Hakim及聖殿騎士團大團長Robert de Sablé。

阿泰爾把各人逐一刺殺，並了解眾人之目的為利用從所羅門聖殿取得之古代遺物控制人民思想以帶來和平，而聖殿騎士團之最終計劃為聯合十字軍及撒拉森勢力以摧毀刺客組織，但Robert de Sablé在垂死時透露拉希德丁真實身分乃騎士團之一員，因企圖獨佔遺物而派遣阿泰爾刺殺其餘九人。阿泰爾回到刺客組織保壘與拉希德丁對質時獲知真相：該遺物來自一個人類以前的文明（Those Who Came Before），名為「伊甸碎片」（Piece of Eden），又稱「禁果」（The Apple），能控制人類思想及造出幻象，而古代之超自然現像包括摩西分紅海、十災、迦拿的婚禮中水變成酒、特洛伊戰爭中神明顯靈等全為此遺物造出之幻象。利用「伊甸碎片」之力量，拉希德丁把九名已被刺殺的目標重新幻化、把自己分裂出八個幻影及作出瞬間移動與阿泰爾展開決鬥。阿泰爾把各幻術擊破後擊敗拉希德丁並將之刺殺，而「伊甸碎片」此時投射出位於全世界其餘多塊碎片的立體影像（也是Abstergo希望得到之記憶）。

戴斯蒙、現代刺客及Abstergo（現代聖殿騎士團）之事跡於後繼作品《刺客教條II》中續有敘述。

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